NY∕T 3308-2018 动物皮张源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法(农业)
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ID： |
E92DBBC96C23463490727CF1F9B865C0 |
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文件大小(MB)： |
0.69 |
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页数： |
13 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-20 |
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ICS 59.140.20,B 45 NY,中华人民共和国农业行业标准,动物皮张源性成分鉴定,实时荧光定性PCR法,NY/ T 3308一2018,Identification of animal-derived materials in leather一,Qualitative realtime PCR method,2018-12-19 发布2019-06-01 实施,',‘~, 吁."," 1 、、中华人民共和国农业农村部发布,目。吕,木标准按照GB/ T 1. 1-2009 给山的规则起草,本标准由农业农村部畜牧兽医局提tLl 0,本标准由全国畜牧业标月l'千七技术委员会(SAC/ TC 274) 归口,本标准起草单位，山东省农业科学院生物技术研究中心,NY/T 3308- 2018,本标准主要起草人步迅、范阳阳、文1J艳艳、张全芳、胡悦、谷玉假、马德源、李F挝、杨雪、部IIlj IIj!j一、陈写,燕、刘国政、王兴军,T,NY/T 3308-2018,动物皮张源性成分鉴定实时荧光定性PCR 法,范围,本标准规定了利用实时荧光定性PCR 法对水貌、狐狸、兔、牛(普通牛、黄牛) 、马、猪、羊(绵羊、山,羊)、貌子和l 家犬9 种动物皮张源性成分进行位副,本标ìfl 适用于动物皮张及初加r c' 圈圈圈脑、黄牛)、马、猪、羊〈绵羊、山羊)、箱,子和家犬9,本方法检:11 限为1 % ,2 规范性引用文件,3,3. 1,3. 2,实时荧,在PCR,4 原理,根据线粒体16 S,采用TaqMa n 实时荧光,狸、兔、牛(普通牛、黄牛〕、马,5 试剂或材料,除另有规定外， 仅使用分析纯试剂.,5. 1 水， GB/ T 6682 ，一级.,5. 2 1 mol/ L Tri s - HCI(pH 8 . 0) 溶液称取1 2 . 1 g Tri s 笠于100 mL 烧杯中，加入80 mL水，用浓HCI,调节pH 至8 . 0 ， jJfl水定容至100 mL, 103. 4 kPa C1 21.C) 灭菌20min ， 室温保存待用.,5.3 1 mol/ L Tris - HCI(pH 6 . 4) 浴液 称i驭1 2 . 1 g Tris 'i't 于100 mL 烧杯中， 1JlI入80 mL 水，月2 浓,H CI 调节p l-I 至6 . 4 ， 加水定容至100 mL, 103. 4 kPa 蒸汽压C1 2 1.C)灭ff 20 min ， 室温保存待用,5.4 0. 5 mol/ L EDTA ( pH 8 . 0) 浴液:称取1 8 . 6 1 g Na, EDTA ?2H, O 'i'i 于100 mL 烧柯中，如l 入,80 mL水， 用1 0 % lfJ Na OH 浴液，调节pH 至8 . 0 ， jJU水定容至100 mL，商店，灭菌后室温保存待用.,NY/T 3308- 2018,5.5 10 %十二锐'lili硫股钊(SOS) ， 称垠10 g SOS 浴解于80mL 元菌水中. !JJI水定容至100m L。储存于,灭在i过的容然中待用,5. 6 5 mol/ L NaC I 浴液:称Jll( 29. 22 g NaCI 浴解于80m L 无菌水中，力11 7Jc定容至1 00 mL. 在1 03 . 4 kPa,蒸汽庇(1 2 1 .C)条件下灭菌20 min ，室源保存待用.,5 7 细胞裂解被(Ly si s Buffcr) ， J仅1 mol/ L Tris - l-ICI(pH 8 . 0) 溶液20 mL. O. 5 mol/ L EOT八(1' l-I,8 . 0) 溶液5 mL. 5. 0 mol/ L NaCI 溶液1 0 mL.I0% SOS 浴?在5 mL. IJJI水定容至100 mL. 很匀,5. 8 20 mg/ mL 蛋臼酶K 浴液稍量。.2 g 蛋白酶冻干品，如l水浴解.lm 水定容至10 mL. 分装后于,一2 0.C保存,5. 9 RN八隅溶液将1 g 1;东干品RNA 酶A 浴解于6mL 元~f水中，于100.C 力II热1 5 mio ，缓慢冷却l 至,室洞.110水定容至1 0 mL. 分马克成小份存于20.C ,5. 10 硅珠悬浮液， J仅5 g 的磁j庇力u入到20mL 的水中充分混合， ff.ft止24 h . 弃掉上消液，再加入20 mL,的水中充分混合.1ll:ifft止5 h . 弃去上活液。在沉淀的破珠中力II人5 mL 的水，再IJJI人5 μL 的浓盐酸， 充,分混合，调节p H 至2 . 0.,5 11 ON A 结合液(?inding Buffcr) ，称取60 g 异硫低自主/JIll (GUSCN) .IJl1入5 mL 1 mol/ L Tris - l-ICI,( 1' 1-1 6 . 4) 溶液，再加入8 mL O. 5 mol/ L EOTA< p!-! 8 . 0) 浴液，再加入4 mL 聚乙二醉辛基苯基隧(Tr ition,X - 100) (温度60.C) .lm水定容至100 mL ,5. 12 襟洗液( Wa sh ing Buffcr) ，称取6 0 g 异。íEí现股/JIll (GUSCN). 力JI 入5 mL 1 mol/ L Tris ?!-!CI(pI-l,6 . 4) 浴液， 再加入8 mL O. 5 mol/ L EOTA(p!-! 8. 0) .lm水定容至1 00 rr止,5.13 70 % 乙~j: ， 盘i仅70 mL 乙醉，加入……
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